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液相色谱仪HPLC同时测定化妆品中的3种苯扎氯铵同系物
更新时间:2019-07-31   点击次数:2743次

1 实验部分

1. 1 仪器与试剂

Agilent 1220 液相色谱仪,配自动进样器,Agilent G1315B 二极管阵列检测器( 美国Agilent公司) ; RE-2000 型旋转蒸发器; KQ-5200 型超声波清洗仪; TGL-16M 型高速台式冷冻离心机; Milli-Q 去离子水发生器( 美国Milli-Q 公司) 。乙腈( 色谱纯) ; 甲酸、乙酸铵、三乙胺、冰醋酸( 分析纯) ; C12-BAC、C14-BAC、C16-BAC( 纯度≥99%,美国Sigma 公司) 。样品: 本单位检验样品。

1. 2 标准贮备溶液、工作溶液及缓冲溶液的配制

分别准确称取C12-BAC、C14-BAC、C16-BAC 标准品各0. 1 g,至0. 000 1 g,用20%甲醇水溶液配成10 g /L 的标准储备液,该溶液在4 ℃下保存。取适量的上述3 种标准储备液,用含0. 5% 甲酸的甲醇配成分别为5. 0、25、100. 0、500. 0、1 000. 0、3 000. 0 mg /L的混合标准工作溶液。乙酸铵缓冲溶液: 称取3. 08 g 乙酸铵置于烧杯中,加水溶解并定容至1 000 mL,加1 mL 三乙胺,用冰醋酸调节pH 至4. 0,过0. 45 μm 滤膜,待用。

1. 3 样品处理方法

1. 3. 1 护发素等膏霜类样品

称取0. 5 g 样品,至0. 01 g,置于25 mL 比色管中,加入20 mL 含0. 5% 甲酸的甲醇超声波提取20 min,然后加入0.2 g 氯化钠,用含0. 5% 甲酸的甲醇定容至刻度,经滤纸过滤,吸取15 mL 滤液至100 mL 蒸发瓶内,并将其接至旋转器上,于45℃水浴中减压蒸馏至干,然后准确用3 mL 含0. 5%甲酸的甲醇溶解,经滤纸过滤,过0. 45 μm 滤膜,滤液供HPLC 分析。

1. 3. 2 洗发水等液态样品

称取1. 0 g 样品,至0. 01 g,置于10 mL 容量瓶中,加入9 mL 含0. 5% 甲酸的甲醇,超声波提取10 min,用含0. 5%甲酸的甲醇定容至刻度,经滤纸过滤,过0. 45 μm 滤膜,滤液供HPLC 分析。

1. 4 HPLC 条件

色谱柱: 资生堂CAPCELL PAK SCX 柱( 250mm × 4. 6 mm,5 μm) ; 柱温: 30 ℃; 进样量: 20 μL;检测波长: 260 nm; 流动相: ( A) 乙腈和( B) 乙酸铵缓冲溶液( pH 4. 0) ; 梯度洗脱程序: 0 ~ 15 min,100%A 线性降至75% A; 15 ~ 20 min,75% A; 20~ 26 min,100%A。流速: 1. 0 mL /min。

1. 5 定性定量方法

采用标准物质的保留时间和峰扫描光谱纯度对照两种方式对样品峰进行定性,以外标法定量。2 结果与讨论

2. 1 样品提取

为了充分提取样品中的苯扎氯铵,本实验先分别选择乙腈、甲醇、正己烷作为样品提取溶液进行提取,但试验结果均不理想( 加标回收率低于50%) 。考虑到苯扎氯铵为弱碱性化合物,经过反复试验,发现含0. 5% 甲酸的甲醇能有效地提取样品中苯扎氯铵( 平均加标回收率高于90%) ,因此选择此溶液作为样品提取液。此外,为了提高方法的检出限,本实验选择将护发素等膏霜类样品提取溶液旋转蒸发富集后再进行色谱分析。

2. 2 HPLC 条件的优化

2. 2. 1 色谱柱的选择

考虑到苯扎氯铵为季铵盐类阳离子,而且化妆品中基质干扰较大,为了简化样品的前处理净化步骤,本实验选择SCX 阳离子色谱柱作为本方法的色谱分析柱。

2. 2. 2 流动相的选择

苯扎氯铵为弱碱性化合物,而且3 种苯扎氯铵同系物的性质极为相近,为了有利于色谱峰的分离及峰形的改善,本方法采用乙酸铵缓冲溶液( pH4. 0) 和乙腈为流动相,利用梯度洗脱的方法提高分离效果,测试开始时,流动相中乙酸铵缓冲溶液( pH4. 0) 与乙腈的比例为0∶ 100,然后在0 ~ 15 min 内将二者的比例调整为25∶ 75,通过上述梯度,可以较好地分离3 种苯扎氯铵同系物。

2. 2. 3 检测波长的选择

对苯扎氯铵标准溶液分别用紫外光谱仪进行扫描,发现其在215 nm 260 nm 附近处有共同较大吸收峰,215 nm处响应值比260 nm 响应值高10 倍左右,但是215 nm 为紫外区域的极限,大多数化合物在此有强吸收,因此从色谱测定角度考虑,本方法选择260 nm 为检测波长。在上述优化的色谱条件下得到了令人满意的结果见图1) 

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2. 3 标准曲线、线性范围和检出限

将逐级稀释的标准工作液( 5. 0、25. 0、100. 0、500. 0、1 000. 0、3 000. 0 mg /L) 分别进样20 μL,以分析物的质量浓度x ( mg /L) 为横坐标,峰面积y 为纵坐标进行线性回归,在5. 0 ~ 3 000. 0 mg /L 范围内得到的线性关系: C12-BAC,y = 0. 847x - 1. 635( r = 0. 999 9) ; C14-BAC,y = 0. 580x - 0. 569 ( r =0. 999 9) ; C16-BAC, y = 1. 218x + 0. 568 ( r =0. 999 9) 。同时进行样品添加试验,以信噪比( S /N) 为3 确定3 种苯扎氯铵同系物的检出限,用空白样品提取液进行实验,在信噪比均大于3 的条件下,将此添加量定为检出限。在空白样品( 护发素) 中添加200 mg /kg 的3 种苯扎氯铵同系物混合标准溶液,按1. 3. 1 节方法处理后,经测定6 个平行样品中3 种苯扎氯铵同系物的S /N 均大于10,平均回收率大于92%,相对标准偏差( RSD) 低于7%,因此将200 mg /kg 定为方法的定量限。

2. 4 回收率和精密度

每组准确称取空白护发素类样品份,每份0. 50 g,共组,分别定量加入C12-BACC14-BACC16-BAC 标准品,添加水平分别为2004001 000mg /kg,按1. 3. 1 节方法制备后进行测定,结果见表1。从表中可看出,不同浓度的平均加标回收率为92. 5% 102. 1%,平均RSD 3. 81% 6. 66%( n =6) ,满足实验要求。

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利用本方法对市场销售的25 种各类化妆品进行检测,其中2 种品牌的洗发水检出C14-BAC,含量分别为317. 74 mg /kg 和222. 18 mg /kg,其他各类化妆品未检出目标化合物。图2 为其中一种阳性样品的色谱图。

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结语

建立了化妆品中3 种苯扎氯铵同系物同时测定的HPLC 方法。通过对实验条件进行选择和优化,确定了色谱条件,在20 min内3 种苯扎氯铵同系物可达到*基线分离,而且能有效地排除基质中其他物质的干扰。方法的线性关系、回收率及精密度等各项参数表明,方法的灵敏度和准确度均满足实际样品检测的需要。该方法的样品前处理简单易行,分析快速,对化妆品中3 种苯扎氯铵同系物能有效的提取、分离和测定,结果良好。

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