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安捷伦气相色谱仪测定鱼油中DHA、EPA的含量
更新时间:2017-12-25   点击次数:2578次

安捷伦气相色谱仪测定鱼油中DHA和EPA的含量-深海鱼油是指从深海中鱼类动物体中提炼出来的不饱和脂肪成分,分别为EPA和DHA。鱼油是指富含EPA(二十碳五烯酸)、DHA(二十二碳六烯酸)的鱼体内的油脂。普通鱼体内含EPA、DHA数量极微,只有寒冷地区深海里的鱼,如三文鱼、沙丁鱼等体内EPA、DHA含量*,而且陆地其他动物体内几乎不含EPA、DHA。因此选用深海鱼来提练EPA及DHA。

作用功效

1、调节血脂,清理血栓,防止血液凝固,预防脑血栓、脑溢血及中风。

2、预防关节炎、缓解痛风、哮喘,暂时缓解由关节炎引起的肿痛。

3、预防老年痴呆症、营养大脑、改善记忆。

4、改善视力、防治老花眼。

5、维护视网膜。

 

随着消费者需求量的不断增加,市场上鱼油制品层出不穷,但其有效成分EPA、DHA含量存在较大差异,因此,建立鱼油制品中EPA与DHA的快速检测方法,识别假冒产品,具有一定的意义。

 

一、实验部分 

1.1  

仪器及材料

安捷伦气相色谱仪7820A(附氢火焰离子化检测器) 

1.2  色谱条件

 

色谱:Alltech EC-1000,30m×0.25mm×0.25μm;色谱柱温度:198 ℃恒温3 min,以10 ℃/min升温至248 ℃,维持12 min;进样口温度:280 ℃;FID检测器温度:280 ℃;进样方式:分流,分流比30:1;进样量:1μL;载气:氮气。 

1.3  试剂

 

EPA/DHA甲酯标准品(纯度≥99%),内标物——二十三碳酸甲酯标准品(纯度≥99%),均购于美国SIGMA公司。2 mol/L氢氧化钾-甲醇溶液。正庚烷、甲醇均为色谱纯、氢氧化钾为分析纯。 

1.4  操作步骤

1.4.1  标准溶液制备

  DHA甲酯、EPA甲酯、二十三碳酸甲酯标准样 品:均配制成浓度为1.0 mg/mL的正庚烷溶液。 1.4.2  样品制备[4] 称取试样500 mg至具塞试管中,用移液管移取5 mL正庚烷溶解试样,用移液管移取2 mL氢氧化钾—甲醇溶液,盖上玻璃盖猛烈振摇1 min后,加蒸馏水至试管颈部,置于离心机以3000 r/min离心5 min,移取2 mL上清液至具塞试管,加入2 mL内标液,定容置10 mL,供上机测定。以标准品保留时间定性,由相对质量校正因子来定量计算鱼油样品中的EPA和DHA含量。

1.4.2  样品制备

称取试样500 mg至具塞试管中,用移液管移取5 mL正庚烷溶解试样,用移液管移取2 mL氢氧化钾—甲醇溶液,盖上玻璃盖猛烈振摇1 min后,加蒸馏水至试管颈部,置于离心机以3000 r/min离心5 min,移取2 mL上清液至具塞试管,加入2 mL内标液,定容置10 mL,供上机测定。以标准品保留时间定性,由相对质量校正因子来定量计算鱼油样品中的EPA和DHA含量。

1.4.3  结果计算 

对所得的色谱图,以内标法进行结果计算: 

 

式中:AX—EPA、DHA的峰面积;AIS—内标峰的峰面积;

FX—EPA或DHA的校正因子;WIS—样品中内标物的加入量(mg);WS—样品量(mg);FW—EPA、DHA甲酯换算成EPA、DHA的换算因子,EPA=1.105,DHA=1.096;25—样品前处理过程中稀释倍数。

二、安捷伦气相色谱仪测定鱼油中DHA和EPA的含量结果讨论

 

2.1  样品前处理方法的选择 

油脂中脂肪酸的测定通常需要甲酯化处理,常用的甲酯化方法有三氟化朋法、*基氢氧化硫(TMSH)法、甲醇钾法、重氮甲完、盐酸/甲醇、硫酸/甲醇和氢氧化四甲胺/甲醇等[5]。本文主要用氢氧化钾/甲醇法,针对性检测鱼油制品中的EPA与DHA,该法具有操作简单、快捷的特点。 2.2  EPA甲酯和DHA甲酯的色谱分离 

深海鱼油样品加入内标C23:0甲酯的气相色谱图见图1

 

由图1可见,EPA甲酯、DHA甲酯和C23:0甲酯 的保留时间分别为12.898 min、18.052 min、14.785 min,三种脂肪酸甲酯分离良好,并且其余组分不干扰测定。 

2.3  校正因子的测定 

采用内标法测得EPA甲酯和DHA甲酯对内标C23:0甲酯的相对质量校正因子,结果见表1。

 

2.4  方法精密度

 

取同一深海鱼油样品5份,按1.4.2所述步骤测定,1.4.3定量分析,得EPA和DHA的精密度,结果见表2。

 

2.5  EPA和DHA的回收率

 

于100 mg的深海鱼油样品中分别加入一定量的EPA和DHA,按1.4.2所述步骤测定,1.4.3定量分析,进样次数为5次,测定结果见表3。

 

2.6  样品测定

 

对3种市场上销售的深海鱼油样品进行测定,测定结果见表4。由表4可知,样品1中EPA、DHA含量比标称数据明显偏低,样品2、3中EPA、DHA含量与标称数据基本吻合。 

三、安捷伦气相色谱仪测定鱼油中DHA和EPA的含量结论

 

内标法是气相色谱当中一种比较理想的定量方法,它要求内标物与被分析物质的化学性质要相似,而对操作条件要求不高,内标法是测定脂肪酸含量的方便准确的定量方法。一般通常使用C17:0等单饱和脂肪酸甲酯作为测定脂肪酸的内标物,其保留时间与EPA和DHA的保留时间相差较大。使用二十三碳饱和脂肪酸甲酯作为测定EPA、DHA的内标物,其性质和EPA、DHA相近,保留时间位于两者之间,并且通过不同鱼油样品的分析,试样中*不含有C23:0,不受试样中其它组分峰的影响,能满足准确 测定EPA和DHA的要求。

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