一、   液相色谱流动相的性质、要求

  ① 流动相不得改变填料的任何性质。    ②纯度。色谱柱的寿命与流动相有较大的关系，特别是其所含杂质在柱上有大量沉积的溶剂。③与检测器匹配。    ④粘度要低。高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压增加，分离时间延长。选择沸点在100℃以下的流动相。

二、  液相色谱流动相的pH值

采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解 离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值 时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱 碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。

三、流动相的选择。

 在化学键合相色谱法中，溶剂的洗脱能力直接与它的极性相关。在正相色谱中，溶剂的强度随极性的增强而增加；通常采用烷烃加适量极性调整剂。 反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈等。极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性 有显著影响。一般情况下，甲醇-水系统能满足多数样品的分离要求，且粘度小、价格低，是反相色谱zui常用的流动相。

四、流动相的滤过。

所有溶剂使用前都必须经0.45μm滤膜滤过，以除去杂质，色谱纯试剂也不例外。 用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相滤膜和水相滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用 于有机溶剂，否则滤膜会被溶解。溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，有机相滤膜。

五、流动相的脱气。

所用流动相必须先脱气，否则容易产生气泡，影响泵的正常工作。

脱气方法：

1.氦气脱气法

2.电磁脱气法

3.超声波脱气法：超声脱气优点：10-20分钟已足够；不影响溶剂组成。

注意：超声时应避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。

六、流动相的制备。

用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求，水应为新鲜制备的高纯水，利用超级纯水器制得或用重蒸馏水。凡规定pH值的流动相应使用精密pH计进行调节。应配制足量的流动相备用。
 七、流动相的贮存。

流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致 溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。 磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用。