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Waters2695液相色谱仪HPLC操作规程
更新时间:2016-01-08   点击次数:6358次

[目的]
    规范Waters液相色谱系统的使用和维护。

[范围]
    本规程适用于Waters液相色谱系统的使用和维护。
[职责]
    质检室仪器分析员负责Waters液相色谱系统的日常使用和维护。
[系统组成]
    本系统由Waters 600E多溶剂输送系统(有梯度控制器的高压输液泵)、Waters在线脱气机、Rheodyne 7725i手动进样阀、Waters 2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成,另外还包括打印机、断电保护器和通风柜等辅助设备。

[开机程序]

1. 状态检查:

1)检查仪器外观是否完好

2)检查各种线缆连接是否稳固,外表有无损伤痕迹

3)确认环境温度在15至35℃之间

4)相对湿度在20%至80%之间

3. 接线要求:

1)液相色谱主机电源

2)连接电脑主机和显示器电源

4. 开机步骤:

1)打开电脑电源,进入windows系统

2)打开液相色谱电源,仪器开始自检(约5~6min),待仪器操作面板上出现“Idle”字样表示自检成功,仪器进入待命状态。

 

[测试步骤]

1. 进入软件

1)双击电脑桌面上的Empower快捷图标,出现Empower登陆窗口。输入用户名与密码,默认账号为“system”,密码为“manager”,点击“OK”进入Empower工作站。

2)选择“运行样品”界面,点击“确定”,然后选择待选定的操作项目以及色谱系统

 

2 编辑仪器方法和方法组

1)在“运行样品”界面中,监视区单击方法组编辑向导。

2)选择新建按钮,弹出仪器方法编辑器。

3)通用编辑页面中,可设置单次输送体积,查看脱气选项,确认设置正确,选择等度或者梯度,总流量以及流动相配比等选项。

4)单击2475图标,弹出2475编辑界面,在波长模式中选择相应的波长模式,单波长或者双波长,输入所需的波长,选择相应的采样速率,一般为2点/秒。

5)点击“文件”,选择“另存为”,输入仪器方法名称,点击“保存”,退出。

6)在被选项中选择所需的仪器方法名称,点击“下一步”。

7)在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法(如果没有合适的方法选择"无处理"、"无报告"),点击“下一步”。

8)输入方法组名称,单击"完成"。

 

3 运行方法进样

1)在“运行样品”界面中,选择相应的仪器方法,点击“监视器”,在监视窗口监视基线至系统平衡,停止系统监视状态,点击停止按钮。单进样,点击参数编辑快捷方式进入定义单进样参数编辑界面,输入样品名、功能、方法组等参数。点击“进样”。

2)建立样品组和样品组方法

选择“样品组”任务栏,进入样品列表,依次设置以下内容:样品瓶号、样品名称、样品类型、进样次数、进样体积、运行时间、方法组、、下一进样延迟时间等,点击“运行”,方法组开始进样。

[更换溶剂]
1.打开600E泵后,转动进口集合管阀手柄(以下简称手柄)至RUN位置;
2 .将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂,向右打开参照阀(断开柱和进样器);
3. 按[Direct]键使其显示直接控制屏幕,设流速为1ml/min(梯度配比阀在0ml/min时不工作);
4. 选择欲使用的某一溶剂通道,设其比例为100%,其它为0%;
5. 将输液管从原有溶剂瓶中取出,放入一干净的空瓶中;
6. 逆时钟转动手柄至DRAW位置,用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂;
7. 再将输液管放入新溶剂瓶内,继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止;
8. 转动手柄至RUN位置,将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。
9. 重复5.2.2.4.~5.2.2.8.直至所有即将使用的溶剂更换完毕。

[排气泡]
1. 打开参照阀,换流动相为100%超纯水,设流速为10ml/min(注意:确认参照阀是打开的,否则可能损坏安装好的柱);

2. 转动进口集合管阀手柄至DRAW位置,用启动注射器抽出约10ml水;
3. 顺时钟转动手柄至INJ位置,缓慢用力使水通过泵头从参照阀出口管排出(注意不要将气泡注入泵中);
4. 按[Stop flow]屏幕键停泵,关上参照阀。
5. 如按以上方法不能排尽气泡,从柱入口处拆下泵出口管,用塑料管连接至塑料烧杯中,设流速为10ml/min,冲洗2~5min(或更长时间)后停泵,重新接上柱。

[平衡系统(分两种情况进行)]
1. 等度模式
1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min,以超纯水冲洗系统10min。
1.2. 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液,如漏液应予以排除。
1.3. 观察泵控制屏幕上的压力值,压力波动应在平均值的5~10%以内。如超出此范围,可初步判断为柱前管路仍有气泡,重复5.2.3.下的步骤。
1.4. 压力波动平稳后,换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前,让zui少5~6倍柱体积的流动相通过系统。
1.5. 在QuickSet窗口下的Instrument Method档内选择所需的仪器方法,按「Monitor」(此后泵由软件控制),观察基线和压力变化。如果冲洗至基线漂 移<10-3Au/min,噪声为10-4Au数量级,且压力平稳时,可认为系统已达到平衡状态,可以进样。5.3.1.6. 按「Abort」图标(左上第五个),停止监视基线。
2. 梯度模式
2.1. 按检验方法规定的条件冲洗平衡系统,并注意压力波动变化和排气泡。
2.2. 在进样前运行1~2次空白梯度。

[进样]
1. 在QuickSet窗口内左下部选标签,在Sample Name档内填写试样名称;在Function档内选择试样类型(标准选“Inject Standards”;样品选“Inject Samples”);在Method Set档内选择所需的方法组;在Injection Volume档内输入进样体积;在Run Time档内输入记录时间。
2. 用针头滤器过滤试样溶液(注射液可不必过滤),用试样溶液清洗注射器,并排除气泡后抽取适量。如按部分装液法,用微量注射器定容进样时,进样量应不大于定量环体积的50%,并要求每次进样体积准确、相同;5.4.2.2. 如按*装液法,用定量环定容进样时,进样量应不小于定量环体积的3倍(5~10倍准确性更佳)。
3. 按标签内右边的进样(Inject)按钮,等待窗口底部状态档内显示“Waiting”后,方可进样。
4. 将进样阀手柄转动至Load位置,将注射器针*插入进样阀入口中,平稳地注入试样溶液,除另有规定外,让注射器留在进样阀上,将进样阀手柄快速转动至Inject位置,系统将自动运行,采集数据并记录图谱。
5. 让进样阀手柄保持在Inject位置,到下次进样前1~2min切换回Load位置,将注射器从进样阀中拔出。
6. 先用水再用试样溶液清洗注射器后,按以上程序继续进样,直至完成。

[数据处理(外标法)和打印]
1. 右击系统主界面下的『Browse Project』图标,选择相应的项目,按「OK」进入Project窗口,选标签。

2. 建立处理方法 选择一个待积分的标准,右击后选“Review”进入Review窗口。按「Processing Method Wizard」图标(左边*个)进入New Processing Method向导窗口,按「OK」。
2.1. 划入一个感兴趣的zui窄的峰,按「Next>」;
2.2. 划入一段包含噪声的基线,按「Next>」;
2.3. 划入一段要积分的区间,按「Next>」;
2.4. 根据情况选择zui小峰面积和zui小峰高,按「Next>」、「Next>」;
2.5. 在Name档内输入各组分峰的名称,按「Next>」、「Next>」;
2.6. 在Method Name档内填写方法名称,按「Finish」。退出Review窗口。
3. 修改标准 选中所有标准,右击后选“Alter Sample”进入Alter Sample窗口。
3.1. 在Sample Type档内将Unknown改成Standard;
3.2. 按「Amount」图标(左上第六个)进入Component Editor窗口;
3.3. 按「Copy from Process Method」图标(左上第五个),选择刚建立的处理方法,按「Open」,在Value和Units档内分别输入标准所含各组分的数值和单位,完成后按「OK」回到Alter Sample窗口;
3.4. 按「Save」图标存盘,退出Alter Sample窗口。
4. 积分 先选中所有标准,再选中所有未知样品,右击后选“Process”进入Background Processing & Reporting窗口,选Use specified processing methods,在右边档内选择刚建立的处理方法,按「OK」。
5. 打印 在Project窗口下选标签。
5.1. 选中要打印的标准/样品,右击后选“Preview”进入Open Report Method窗口,选合适的打印方法,按「OK」进入Report Publisher (Preview)窗口,预览打印的结果。按打印(Print)图标(左上第二个)即可打印结果。
5.2. 按「Close」可进入Report Publisher窗口对报告方法进行修改,完成后按「Print」图标(右数第二个)即可打印结果。
6. 数据处理完成后,关闭所有窗口,在主界面下按「Logout」退出系统,关闭Millennium32软件,再依次关闭电脑主机、显示器、打印机。
7. 清洗系统和关机
7.1. 数据采集完毕后,关闭检测器,继续以工作流动相冲洗10min后,换水冲洗。

[关机程序]

1)关机前应用适当比例的有机相和水相冲洗柱子

2)关闭仪器电源

3)关闭电脑电源

 

[维护保养程序]

1)定期清洁,保障环境和仪器室内卫生条件,防尘。

2)使用完毕后用防尘布遮盖仪器如连续3个月未使用仪器,将仪器通电1个小时后再关闭,除掉仪器内部湿气。

 

注意事项

1.使用仪器前必须仔细阅读仪器使用说明书。
2.按仪器使用要求准备测试样品,不得测试不符合要求的样品。
3.小心操作,防止样品污染和腐蚀仪器。
4.有机溶剂有害健康,各溶剂瓶口应封严。
5.仪器使用后按操作程序,切断电源,清理擦拭仪器,盖上仪器罩。
6.在操作时发生故障应停止使用,并及时通知管理人员。
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