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安捷伦液相色谱仪研究鬼针草中维生素K1
更新时间:2016-01-04   点击次数:1617次

1 前言

鬼针草具有多方面的药理活性, 抑菌及抗炎、对中枢神经系统、抗高血脂及血栓形成等作用, 在临床应用上具有很好的效果。维生素K1 (V K1) 又名叶绿醌, 为黄色油状物, 广泛存在于天然绿色植物中, 有促进血液凝固的作用。V K1 可用来治疗和预防骨质疏松症和骨折。有学者认为肝癌的发生与维生素K 缺乏有关,V K1 对动脉硬化的治疗也具有很好的作用。鬼针草中V K1 的研究未见文献报道, 本实验对鬼针草中V K1 的含量进行定性和定量研究。

2 实验部分

2. 1 试剂和仪器

2. 1. 1 试剂

鬼针草样品1 和样品2: 分别于2006 年5 月3 日和5 月13 日采摘于辉县山区, 洗净、晾干、磨碎、过筛; 磷酸氢二钠; 丙酮(分析纯) ; 石油醚(沸程30—60℃, 分析纯) ; 无水硫酸钠; 甲醇(色谱纯) , 正己烷(色谱纯) ;V K1 标准品(美国Sigma 公司, 纯度> 98% ) ; 洗脱液: 石油醚∶**(97∶3) ; 标准储备液: 取50mg V K1 标准品, 用正己烷溶解定容至50mL , 即浓度为1. 0mgöm L , 零下8℃避光保存。

2. 1. 2 仪器

Agilengt1200 液相色谱仪 ; RE252 旋转蒸发仪;梅特勒AL 2104 电子天平(梅特勒基础型分析天平(AB-L系列))。

2. 2 样品的测定方法

植物中V K1 的测定方法有分光光度法、薄层色谱法及液相色谱(HPLC) 法。本实验选用失活的磷酸盐处理过的氧化铝做色谱柱, 对样品进行净化处理, 然后再进行HPLC 分析, 取得较好的分离效果。

2. 2. 1 样品的提取及净化

称取已磨碎过筛的脱水鬼针草样品3. 4g,进行样品提取、装柱、净化, 用旋转蒸发器收集流出液, 流出液于旋转蒸发器浓缩近干, 取下用氮气吹干后, 用正己烷定容为1. 0mL。将定容液移入小塑料离心管中, 5000rpm 离心5m in, 上清液供HPLC 分析。

2. 2. 2 样品的测定

HPLC 色谱分析条件分析柱: ZORBAX SB2C18, 5Lm, 4. 6mm ×150mm; 流动相: 甲醇∶正己烷(75∶25) ; 进样量: 20LL; 柱温: 20. 8℃; 流速1. 5mL öm in; 紫外检测器: 波长248nm , 量程0. 05。取样品净化液20LL 注入液相色谱仪中进行分析, 样品2. 2 分别注入5 次, 数据见表1。2. 2. 3 样品的分析用标准色谱峰的保留时间对样品进行定性分析: 取空白样和标准液分别进样进行分析(分析条件与样品相同) , 色谱峰保留时间为2. 18±0. 1m in, 如图1。在本实验条件下, 鬼针草样品在2. 18±0. 1m in 有峰出现, 确认鬼针草中存在维生素K1。

3 结果与讨论

3. 1 校准曲线的绘制

分别取维生素K1 标准应用液0. 25, 0. 50, 1. 00, 2. 00, 3. 00, 4. 00, 5. 00mL , 加入至50mL 容量瓶中, 即校准曲线中各点V K1 含量分别相当于5, 10, 20, 40, 60, 80, 100LgömL。然后再按2. 2. 3 条件进行HPLC 测定, 记录峰高。以标准含量为横坐标, 峰高得回归方程, = - 0. 78607+2. 93053C,= 0. 9996, RSD= 2. 52%。检测限: 取15—20m in 基线的zui高峰与zui底峰差值的值的5 倍, 由回归方程测出浓度, 即为检测限, zui小检测限为2. 0mgöL.

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3. 2 结果计算

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式中: ——样品中V K1 的含量, Lgö100g; ——由回归方程求出的V K1 的含量, Lg; 2——样品提取后的定容体积,mL ; 1——样品净化处理时的提取液量,mL ; 2—— 样品净化后的定容体积,mL ;——样品质量, g。V K1 含量: 样品1 中为2697. 4—3003. 5Lgö100g, 样品2 中为3404. 1—3571. 7Lgö100g。

3. 3 回收率的测定

分别取样品1 和样品2 的净化液, 加入等体积的V K1 标准液, 操作步骤同样品, 上机分析, 重复5 次, 记录峰高, 样品回收率为94. 97% —100. 5%。

4 结论

通过对不同时期的两种样品定量分析, 发现鬼针草V K1 的含量是变化的, 随着生长期的增长而增加, 这些为鬼针草在医学上的临床应用提供了依据和参考, 为以后鬼针草的开发和利用创造了条件。

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