本实验采用液相色谱测定桑白皮中绿 原 酸 的 含 量，旨在为桑白皮的质量控制提供方法，为今后进一步的开发与研究提供科学依据。

1仪器和试药

Agilent1100高 效 液 相 色 谱 仪(美 国 安 捷 伦 公司) ;KQ-200VDB型超声波清洗器;LG16-WA型台式 高 速 离 心 机;SH2-D循环水式真空泵;绿 原 酸 对 照 品，甲 醇 为 色 谱 纯(FisherScientific公 司) ，水为高纯水，其余试 剂 为 分 析 纯，桑 白 皮 饮 片(批 号20090907，20100525，20100128，20101026，20100705)。   

2方法与结果

2.1色 谱 条 件

DiamonsilC18色 谱 柱(4.6mm×250mm，5μm) ;流动相乙腈-0.4%磷 酸(11∶89) ;检测波长327nm;柱 温30°C;流 速1mL·min－1;进 样量10μL。见图1。

2供试品溶液提取方法优化

2.2.1星点设计试验

根据 预 试 验 结 果，采 用 星 点设计法对桑白皮供试品溶液的甲醇超声提取方法进行优化，以绿 原 酸 的 含 量 为 评 价 指 标，选 择 甲 醇 体 积分数、超声时 间、溶 媒 比3个 因 素。星点 设 计 实 验 因素按矩阵选择的各水平及其对应的编码值见表1～2。

2.2.2模型 拟 合

以 绿 原 酸 含 量 为 因 变 量，对 实 验结果 进 行 二 项 式 拟 合，以 方 程 各 项 系 数P＜0.05作为显著标准，对方程进行优化，得二项式方程:Y=0.32762+0.015799X1+0.020272X3－0.03351X12－0.01597X22－0.03008X23+0.01489X1X2+0.021596X2X3(r=0.8901)

2.2.3提取条 件 优 化 和 验 证

根据二项式方程绘制 响 应 曲 面 图，结 果 见 图2。对 二 项 式 方 程 进 行 求导，可 得:当提 取 条 件 为60.7%甲 醇、提 取 时 间 为45.5min，溶 媒 比 为11.6倍 时，Y有 预 测 的 zui 大值0.335。本实验zui终选取桑白皮的*提取条件为60%甲 醇、提 取 时 间 为15min，溶 媒 比为10倍。取桑白皮饮片粉末约5g，精密称定，共 取3份，根 据 确定的*提取 条 件 制 备 供 试品 溶 液，按2.1项 下 色谱条件 进 行 测 定。结果绿原酸质量分数平均值为0.365±0.0079mg·g－1。结果表明，本法的提取效果较好。

2.3溶液制备

2.3.1供试品 溶 液 的 制 备

取 药 材 粉 末5.0g，精密称 定，加60%甲 醇50mL，称 重，超 声45min，放冷，补足 质量，滤 过，取 续 滤 液，用0.45μm滤 膜 滤过，即得。

2.3.2对照品溶液的制备

取绿原酸对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成每1mL含 绿 原 酸45μg对照品溶液，用0.45μm滤膜滤过，即得。

2.4线性关系 的 考 察

分 别 精 密 吸 取 对 照 品 溶 液1，2，4，6，8，10μL，注入液相色谱仪，按 上 述 色 谱 条件进行测定，以峰面积积分值Y为纵坐标，对 照 品 量X(μg)为横 坐 标，绘制标准曲线得绿原酸的回归方程Y=2329.0289X+8.1841(r=0.9999)。绿 原酸在0.045～0.45μg，峰 面 积 与 进 样 量 呈 良好 的 线性关系。

2.5精密度试验

精密吸取对 照 品 溶 液，重 复 进 样6次，按2.1项下色 谱 条 件 进 行 分 析，测 定 绿 原 酸峰面积。结果绿原酸峰 面 积RSD0.57%，表 明 该 方 法精密度良好。

2.6稳定 性 试 验

精 密 吸 取 供 试 品 溶 液，分 别 于0，4，8，12，16，24h进 样10μL，按2.1项 下 色 谱条件 进 行 分 析，测 定 绿 原 酸 的 峰 面 积。结 果 绿 原 酸 峰面 积RSD1.26%，表 明 供 试品 溶 液 在24h内稳 定。

2.7重复性试验

取同 一 批 样 品6份，按2.3.1项下制备供试品溶液，依2.1项下色谱条件进行分析，测定绿原酸的峰面积并计算含量。结果桑白皮中绿原 酸 的 平 均 质 量 分 数 为0.402mg·g－1，RSD2.02%，表明该方法的重复性良好。

2.8加样回收率试验

取已测 知 含 量 的 样 品6份，每份2.5g，精密 称 定，分别精密加入绿原酸对照品溶液(0.45g·L－1)2mL，按 供 试 品 溶 液 的 制 备 方 法制备，进 样10μL，记 录 色 谱 图，计算加样回收率，结果见表3。

2.9样 品 测 定

按2.3.1项 供 试 品 溶 液 的 制 备 方法，2.1项 下 的 色 谱 条 件 对5批 桑 白 皮 饮 片 进行 测定，结果见表4。

3讨论

在预试验中，供试品溶液的制备方法考察了超声提取和回流 提 取2种 方 法，结果超声提取含量较高，处理过程较简便，所以本实验选 择 超 声 提 取 为 供试品溶液的制备方法。

星点设计是多因素五水平的优化方法，先利用二项式非线性回归进行分析和计算，得到应变量和自变量之间的函数关系，再利用此函数关系来求出*的自变量值。所以，相 对 于 正 交 设计，星 点 设 计-响 应面优化法能更准备地找到所考察因素的*条件，且在zui低 要 求 下，只 是比 正 交 设 计 多6个 实 验 号。因此，本实验 采 用 星 点 设 计-响 应 面 优 化 法 对 提 取 条件进行优化，该方法有的统计软件可以设计实验矩阵和处理数 据，操 作 方 便，结 果 能 比较 精 确 地 找 到 各考察因素在较佳条件下因变量的zui大值。