新闻中心您的位置:网站首页 >新闻中心 >安捷伦液相色谱仪测定小麦中内源激素
安捷伦液相色谱仪测定小麦中内源激素
更新时间:2017-09-20   点击次数:1838次

安捷伦液相色谱仪测定小麦中内源激素

植物激素对植物的种子萌发、生长、开花、成熟、衰老、休眠等生命活动起直接或间接的调节、控制作用。小麦是我国三大农作物之一,如 何 调 控 其生长发育,进而促 进 分 蘖,提高产量和品质,备 受 农业科研 人 员 的 关 注。了解小麦内源激素的变化规律,对于研究其产量和抗性等具有重要的生产实践价值。

本文研究对小麦中的IAA、ABA、GA3、ZT、SA进 行 分 离 和 测 定,建立一种分析小 麦 激 素 的 有 效 方 法,从 而 为 小 麦 内源激素调节和控 制 小 麦 的 生 长、衰老等研究提供关键技术。

1实验部分

1.1仪器与试剂

Agilent1200高 效 液 相 色 谱 仪,Agilent1200系列泵,可变波长检 测 器,TU1810紫外可见分光光度计,RE-52A旋转蒸 发 仪,320-SpH计,HR-120电 子 天 平,KQ500DE型 超 声 波 脱 气,BeckmanAllegra64R冷冻离心机

玉米素、赤霉素、生长素、脱落酸、水杨酸标准品(纯 度≥99%),甲 醇、乙 酸(色 谱级),石 油 醚、乙 酸 乙 酯(分 析 纯,国 药 集团化学试剂有限公司),实验用水为超纯水。所有试剂在使用前均用0.45μm微孔滤膜过滤。

1.    2标准溶液的配制

用甲醇配制0.2g/L生 长 素、0.1g/L玉 米 素、0.1g/L脱落酸、2.5g/L赤霉素、0.4g/L水杨酸的混合标准溶液。

1.    3样品前处理

称取新鲜小麦叶2g、根5g,分别加入10mL预冷的80%(如无特殊说 明 均 为 体 积分 数)甲 醇,冰浴研磨成浆,保鲜 膜 密 封 后 于4°C冷 浸 过 夜。然 后于4°C条 件 下以8000r/min离 心10min得 上 清液,残渣加入8mL80%的 冷 甲 醇 离 心10min后 合并上清液。全部滤 液 于40°C下减压浓缩至原体积的1/3,加 入30mL石油 醚 萃 取 脱 色3次,弃 醚 相。水相用20mL乙酸乙 酯 萃 取3次,合 并 酯 相,40°C下减 压 蒸 干。加 入pH3.5的 乙 酸 溶 液2mL,过Sep-PakC18小柱纯化,用甲醇洗脱,收集后在40°C下减压浓缩至干。用流动相溶解并定容至2mL,经0.45μm微孔滤膜过滤后进行HPLC分析。

1.    4色谱条件色

谱 柱 为EclipseXDB-C18(250mm×4.6mm,5μm,Agilent公 司),流 动 相A为 甲 醇,B为乙 酸 的 水 溶 液(pH3.6),梯 度 条 件 为0~7min20%A,7~10min20%A~28%A,10~17min28%A,17~19min28%A~40%A,19~35min40%A。流 速 为1mL/min,进 样 量 为10μL。检测 器 波 长 设 置 为254nm;14.5min时 切 换 到240nm;SA洗脱 后 即18min时 切 换 回254nm。检测温度为室温。

2结果与讨论

2.    1样品处理条件的优化

由于水杨酸含量低且易被PVPP吸附,选择Sep-PakC18小 柱 纯 化。对5种激素提取效果良好。

2.2色谱条件的选择

2.2.1流动相梯度

综 合 考 虑 各 激素分离度、峰形的对称性以及缩短分析时间,zui终采用1.4节所述的梯度洗脱条件。

2.2.2流动相的pH

选 择pH3.6的 乙酸的水溶液为 流 动 相B,各峰的分离度以及保留时间都较好。

2.2.3检测波长

选 择 在SA出 峰 前(14.5min)将检测器波长 切 换 到240nm,待 出 峰 *结束后(18min)切回254nm(图1b)。切 换 波 长 更 利于 待 测 组 分 的 分析 检 测。

 

2.2.4流速

流 速 为1mL/min时,各激素能在35min内很好的分离。在优化的色 谱 条 件下,对混合的标准样品进行检测。5种 激 素 能 够 较 好 地 分离和检出。

2.3标准曲线及其线性范围

以5种激素的标准溶液为原液进行逐级稀释,在优 化 的 色 谱 条 件 下 分 析。以峰面积为纵坐标(y),质量浓度 为 横 坐 标(x,mg/L),计 算 各 内 源 激素的回归方程、相关系数和线性范围,同时按3倍信噪比得到 各 激 素 检 出 限(见 表1)。由 结 果 可 知,标准品浓度与峰面积的相关性良好。

2.   4回收率的测定和实际样品分析

取小麦根样品2g,按照1.3节方法制备样品并用上述条件进行 测 定。如 图3所 示,小麦 根 中 的 激素能得到很好 的 分 离。随 后 进 行 加 标 回 收 试 验,结果见表2。

3结论

通过优化小麦中5种内源激素的提取条件以及色谱条件,建立了一种简单、有效的液相色谱分析方法。分离效果理想,加 标 回 收 率 达96%~98%,检出限为0.195~0.976mg/L。方法满足激素 定 量分析的测定要求,为进一步检测小麦生长过程中内源激素的变化、激素代谢与小麦的生长、衰老等相关性研究提供了关键技术。

网站首页 关于我们 新闻中心 产品中心 联系我们
备案号:沪ICP备15056113号-1   GoogleSitemap   技术支持:化工仪器网 管理登陆
© 2018 上海莱睿科学仪器有限公司(www.lairuisci.com) 版权所有 总访问量:542275
主营: tomy高压灭菌锅,tomy高压灭菌器,thermo红外光谱仪,尼高力红外光谱仪,ika磁力搅拌器