忍冬的花和藤均为药用部位，并被《中华人民共和国药典》所收载。而忍冬的叶子被视为金银花和忍冬藤的副产物，产量虽然较高，却一直被视为非药用部位而未得到充分开发利用，造成资源浪费。为此，本文进一步研究了金银花、忍冬新叶及忍冬老叶之间成分含量的差异，为忍冬叶药用价值的开发提供参考。

1实验部分

1．1仪器与试剂

液相色谱仪(Agilent1220，包括四元泵及VWD紫外检测器;Agilent公司) ;超声波清洗机。

对照品:绿原酸(质检编号:PS08072303)、咖啡酸(质检编号:PS08092501)、木犀草苷(质检编号:PS10052501)、异 绿 原 酸A(质 检 编 号:PS100623-01)、异绿原酸B(质检编号:PS100623-02)、异绿原酸C(质检编号:PS100623-03) ，纯度均大于98%，由成都普思生物科技有限公司提供。乙腈为色谱纯(Fisher公司) ;甲酸为分析纯(国药集团化学试剂公司) ;超纯水由Milli-Q系统制备。金 银 花、忍 冬老叶、忍冬新叶均采自河南省邢台市巨鹿县。

1．2对照品溶液的制备

分别称取绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C对照品10mg，用50%(v/v，下同)甲醇水溶液1.5mL溶解并定容;咖啡酸、芦丁、木犀草素对照品10mg，用50%甲醇水溶液10mL溶解并定容;将溶解液过0.45μm有机滤膜，得对照品溶液。

1．3供试品溶液的制备

称取样品粉末(60°C烘干24h，磨碎过40目筛)0.5g，加入50%甲醇水溶液10mL，称定质量;超声提取1h，放冷，再称定质量，并用50%甲醇水溶液补足质量;摇匀，过滤，取滤液过0.45μm的有机滤膜，滤液供液相色谱测定。

1．4液相色谱条件色

谱柱:AgilentEclipsePlusC18(250mm×4.6mm，5μm) ;柱温:20°C;进样量:10μL。流动相:0.3%甲酸水溶液(A)和乙腈(B)。洗脱程序:0～25min，8%B;25～30min，8%B～19%B;30～60min，19%B。流速:1mL/min。检测波长切换程序:0～30min，330nm;30～40min，350nm;40～60min，330nm。

2结果与讨论

2．1实验条件的优化

为了使供试品溶液获得*的提取率，采用50%甲醇水溶液对样品进行超声提取;将超声时间设定为1h，以达到充分提取的效果。由于绿原酸、咖啡酸、芦丁、木犀草素、异绿原酸的zui大吸收波长不一致，如绿原酸在350nm处的吸收值是330nm处吸收值的一半，木犀草苷在330nm处的吸收值约比350nm处的吸收值低20%。为了提高方法的灵敏度，保证绿原酸和木犀草苷等目标化合物都能在各自zui大吸收波长下检测，本文采用了带有检测波长转换程序的测定方法。由于绿原酸、咖啡酸及异绿原酸的检测波长为330nm，芦 丁、木犀草苷的检测波长为350nm，本文优化得到了1.4节所述的检测波长切换程序。

2．2方法学的考察

2．2．1线性关系

取绿原酸、咖啡酸、芦丁、木犀草苷、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C对照品溶液适量混合，得到一定浓度的混合标准品溶液，进而稀释得到不同梯度浓度的混合标准品溶液。取上述不同梯度浓度的混合标准品溶液10μL进样分析，以峰面积Y为纵坐标，进样质量浓度X(mg/L)为横坐标绘制标准曲线，结果见表1。

2．2．2精密度、重现性和稳定性

准确吸取绿原酸、咖啡酸、芦丁、木犀草苷、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C对照品混合溶液10μL，按照1.4节建立的方法进行检测，重复测定5次，记录峰面积，计算各个化合物的相对标准偏差(RSD)均小于3%(见表2) ，表明仪器精密度良好。

精密称取同一批金银花样品粉末0.5g，共5份，按照1.3节方法制备供试品溶液，再按照1.4节建立的方法进行检测，记录峰面积，计算得到各化合物峰面积的RSD为1.68%～3.15%(见表2) ，表明方法的重现性良好。

另精密称取金银花样品0.5g，按照上述方法制备供试品溶液，分别于室温下放置0、2、4、6、8、10、12h后进行检测，计算得到各化合物峰面积的RSD均小于3%(见表2) ，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。

2．2．3加标回收率

精密称取同一批金银花样品粉末5份，每 份0.5g，向已知含量的样品中加入混合标准品，按照以上方法制备供试品溶液，分别进样10μL，按照以上色谱条件进行HPLC测定，记录峰面积，计算各个成分的回收率(见表3)。

2．3样品含量的测定

采用上述建立的分析方法，对金银花样品进行测定。表4结果表明，金银花不同部位的有效成分含量存在差异。对于《中华人民共和国药典》中规定的绿原酸、木犀草苷两种有效成分，金银花、忍冬老叶、忍冬新叶三者中含量差异显著。新叶中绿原酸含量为2.572%，大于中国药典中规定的1.5%;木犀草苷含量为1.498‰，远远大于中国药典中规定的0.5‰。除此之外，作为金银花有效成分的黄酮类物质芦丁，其在忍冬新叶中的含量为1.845‰，比在金银花中的含量1.261‰高46.31%。忍 冬 老 叶中除咖啡酸、木犀草苷含量与金银花中的含量差异不显著外，其他各种有效成分含量均低于金银花中的含量。忍冬不同部位有效成分总含量高低顺序为:金银花＞忍冬新叶＞忍冬老叶，差异显著，但忍冬新叶总含量仅比金银花低6.92%，总含量成分接近，因此忍冬新叶有进一步研究和开发的必要。图1为金银花、忍冬老叶、忍冬新叶和混合标准品溶液的色谱图。

3结论

本文建立了同时测定忍冬中7种有效成分的液相色谱方法。该方法具有操作简单，精密度、重复性、稳定性及回收率高等特点。应用该检测方法，发现忍冬新叶中绿原酸、木犀草苷含量均超过了《中华人民共和国药典》规 定 的 水 平，分 别为2.572%、1.498‰，且7种目标成分的总含量仅比金银花低6.92%，证明忍冬叶中也含有大量的功能成分，有必要对忍冬叶进行深入的研究和开发。本文为更好的评价忍冬品质提供了更有效的方法。