1 材料与方法

1． 1 主要仪器

液相色谱仪HPLC( 配有四元梯度泵、紫外/可见光检测器) ，超声波振荡器，固相萃取装置，离心机，氮吹仪，振荡器。

1． 2 试剂

甲醇( MERCK 色谱纯) ，罗丹明B( AR，天津光复精细化工研究所) ，正己烷( AR)

1． 3 色谱条件

Acclaim 120 C18柱( 5 μm，4． 6 mm × 250 mm) ; 进样量:20 μl; 流动相: 甲醇+ 水( 75 + 25) ，流速1． 0 ml /min;检测波长: 550 nm。

1． 4 标准曲线

标准物( 罗丹明B) 用75% 甲醇配制成1 mg /ml，再用75% 甲醇稀释成0． 1 μg /ml，0． 5 μg /ml，1． 0 μg /ml，5． 0μg /ml， 10． 0 μg /ml 标准系列。

1． 5 样品前处理

1． 5． 1 提取

1． 5． 1． 1 辣椒粉，调味品，水制辣椒酱: 5 g 样品，加5 ml 甲醇，振荡器振荡2 min，超声10 min， 4000 r /min 离心10 min，取上清液备用。

1． 5． 1． 2 油制辣椒酱，肉类: 5 g 样品，加5 ml 甲醇，振荡器振荡2 min，超声10 min，加正己烷5 ml，振荡器振荡2 min，4000 r /min离心10 min，取醇层备用。

1． 5． 2 净化

Sep － pak C18小柱用3 ml 甲醇活化，5ml 水平衡，吸提取液2． 5 ml 加2． 5 ml 水注入固相萃取小柱，控制流速5 ml /min ～ 8 ml /min，依次用5 ml 水、5 ml 50% 甲醇淋洗。再用75%甲醇洗脱，收集洗脱液。

1． 5． 3 浓缩

洗脱液置50℃ 水浴，氮吹仪吹干，用1． 0 ml75%甲醇溶解残渣，过0． 45 μm 滤膜，供液相色谱测定。

2 结果与讨论

2． 1 波长选择

罗丹明B 的75%甲醇溶液于紫外/可见分光光度计扫描，测得该溶液在550 nm 有zui大吸收，选择550 nm 作为测定波长，既可以保证有zui高灵敏度，也可以排除许多无颜色有机物的干扰。

2． 2 流动相选择

选择液相色谱zui为普通的甲醇、水作为流动相，既避免了接触毒性较大乙腈，又减少其它溶液配制步骤，但流动相中甲醇比例太低时，罗丹明B 很难洗脱出来，100% 甲醇又比较快就洗脱出来，选择75%甲醇作为该方法的流动性，既可以保证罗丹明B 在适当时间( 保留时间8． 6 min) 内洗脱出来，又可以与大部分干扰物质分离。

2． 3 方法线性范围与检出限

标准系列各进样20 μl，得到其色谱图( 见图3) ，以标准液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线; 其线性回归方程为Y = 0． 3282 + 5． 2339X，相关系数为0． 9994。该方法在0． 1 μg /ml ～ 10 μg /ml 的线性良好，检出限0． 02 μg /ml，定量下限0． 05 μg /ml。样品进样20 μl，得到其色谱图( 见图1，2) ，其峰面积在标准曲线上查得其对应的含量，或者将其峰面积代入线性回归方程得到其对应的含量。按上述步骤操作，样品检测限低至0． 008 mg /kg。

2． 4 方法回收率与精密度

在样品中加入高、中、低三个不同量的标准，使每一浓度分别进行6 次重复测定，回收率，精密度见表1。

该方法回收率在96． 1% ～ 100． 4%，相对标准偏差RSD( %) 在1． 8% ～ 3． 9%，说明方法的精密度和准确度良好。

2． 5 方法干扰试验

图1，图2 分别是罗丹明B 阴性，阳性样品，由于选择的波长为550 nm，落在可见光区，食品中许多无颜色的有机物在该波长下均未吸收或吸收很小，可以忽略不计，所以基线很平滑，干扰物质很少; 图3 是罗丹明B 标准物色谱图; 图4 是含有罗丹明B，胭脂红，苋菜红，诱惑红，赤鲜红，苏丹红Ⅰ，苏丹红Ⅱ，苏丹红Ⅲ，苏丹红Ⅳ各5 μg /ml 溶液的色谱图，由图3，图4可以看出在该色谱条件下常见的水溶性红色色素胭脂红，苋菜红，诱惑红，赤鲜红和常见的脂溶性红色色素苏丹红Ⅰ，苏丹红Ⅱ，苏丹红Ⅲ，苏丹红Ⅳ均未对罗丹明B 检测造成干扰。

3 结论

本方法*国家标准空白，由于液相色谱－ 紫外/可见检测器比较普及，适合于基层单位罗丹明B 检验，为打击“食品中可能违法添加的非食用物质”提供有力依据。本方法操作简单，由于选择波长为550 nm，在可见光波段，干扰少，选择性好，灵敏度高，准确度和精密度都很好。