安捷伦液相色谱仪HPLC分析六味地黄丸含量

六味地黄丸，滋阴补肾。用于肾阴亏损，头晕耳鸣，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精。主要成分为熟地黄、酒萸肉、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻。

有关六味地黄丸制剂的各成分的含量测定方法如下：

一、山茱萸：

色谱条件与系统适用性试验：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05％磷酸溶液（1：8：4：87）为流动相；检测波长为236nm，柱温40℃。理论板数按马钱苷峰计应不低于4000。

供试品溶液的制备：取本品水蜜丸或小蜜丸，切碎，取约0.7g，精密称定；或取重量差异检查项下的大蜜丸，剪碎，取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声提取（功率250W，频率33kHZ）15分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重 量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，置中性氧化铝柱（100～200目，4g，内径1cm，干法装柱）上，用40％甲醇适量使溶解，并转移至 10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

二、牡丹皮

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（70：30）为流动相；检测波长为274nm。理论板数按丹皮酚峰计应不低于3500。

供试品溶液的制备：取本品水蜜丸或小蜜丸，切碎，取约0.3g，精密称定；或取重量差异检查项下的大蜜丸，剪碎，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声提取（功率250W，频率33kHZ）45分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重 量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

三、单皮酚

Waters2695液相色谱仪；色谱柱为HypersilODS2柱（205mm×4.6mm,5μm）；流动相为甲醇 -2％冰醋酸（55：45）；流速为1.0mL/min；检测波长为275nm；柱温25℃。样品用甲醇超声提取后经Sep-PakC18微柱处理，收集 第12～14mL流出液。

四、墩果酸、熊果酸

Agilent液相色谱仪1200；色谱柱为Shim-PackC18分析柱 4.6mm×150mm,5μm；流动相为乙腈-甲醇-水-乙酸胺70：16：14：0.5；流速1mL/min；检测波长215nm；柱温为室温。样品 处理方法：六味地黄丸（浓缩丸）用水溶解并过滤后，用乙迷加热回流提取，残渣用石油醚（30～60℃）浸泡，弃去石油醚液，残渣用甲醇溶解并定容。

五、马钱素

Waters510液相色谱仪；色谱柱为YWG-C18柱（150mm×4.6mm,5μm）；流动相为甲醇-水（1：4）；流速为0.8mL/min；检测波长为238nm。样品用甲醇超声提取。